此前，在美國第61屆血液學(xué)會年會上，研究人員報(bào)道一種新型異體CD83嵌合抗原受體（CD83 CAR-T）。體內(nèi)異種移植物抗宿主?。℅VHD）模型評估結(jié)果顯示，與模擬轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞組的小鼠相比，注射CD83 CAR-T的小鼠可以顯著提高存活率，注射第21天GVHD靶器官損傷幾乎可以忽略，CD1c+、CD83+樹突狀細(xì)胞、CD4+、CD83+ T細(xì)胞和致病性Th1細(xì)胞在第21天時(shí)顯著減少，Treg與同種異體Tconv的比值也顯著增加，且顯示出很好的耐受性。此外，研究表明CD83 CAR-T能有效殺死急性髓系白血病(AML)細(xì)胞系，靶點(diǎn)和腫瘤外的毒性可忽略不計(jì)。CD83 CAR-T細(xì)胞可以作為一種新的異體CAR-T療法對髓系惡性腫瘤發(fā)揮殺傷的同時(shí)也能很好地避免GVHD的發(fā)生。
CAR-T療法改變了血液惡性腫瘤治療前景，目前雖已有兩款針對血液惡性腫瘤的自體型CAR-T上市，但仍有一些瓶頸限制其發(fā)展。首先，目前自體型CAR-T的T細(xì)胞來源于患者自身，屬于自身訂制產(chǎn)品，且生產(chǎn)工藝復(fù)雜，周期較長，晚期病人在CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中病情不斷惡化，可能錯(cuò)過最佳治療時(shí)間，這在某些高度增殖性疾病(如急性白血病)患者中尤其成問題。其次，很多接受多次化療的病人很難獲得足量且健康的T細(xì)胞，這限制了CAR-T細(xì)胞的制備。最后，每個(gè)患者的T細(xì)胞都有差異，無法保證產(chǎn)品的穩(wěn)定和質(zhì)量控制，很難生產(chǎn)出標(biāo)準(zhǔn)化的產(chǎn)品。
圖1 自體CAR-T的生產(chǎn)工藝與自體方法相比，使用利用健康捐贈者的細(xì)胞生產(chǎn)的異體CAR-T有許多潛在的優(yōu)勢，如易于規(guī)?；团可a(chǎn)從而降低了成本。大量的CAR-T細(xì)胞可以由單個(gè)供體生產(chǎn)，可以立即用于不同患者治療，簡化治療流程。
然而，異體CAR-T也有兩個(gè)常見的問題。首先，給藥的同種異體T細(xì)胞可能導(dǎo)致移植物抗宿主病（GVHD）。其次，這些異體CAR-T細(xì)胞可能被宿主免疫系統(tǒng)迅速清除，限制其抗腫瘤活性。下文介紹不同來源的異體CAR-T療法，以及優(yōu)化當(dāng)前異體CAR -T細(xì)胞的方法。
表1 自體CAR-T與異體CAR-T
目前用于制造異體CAR-T的T細(xì)胞主要來源于外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），少部分來源于臍帶血（UCB）。原則上，這些T細(xì)胞也可以從再生干細(xì)胞中獲得，如誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）或胚胎干細(xì)胞。因?yàn)楫愺wCAR-T細(xì)胞是由健康的供體產(chǎn)生的，與自體CAR-T細(xì)胞相比，這些細(xì)胞沒有受到病人腫瘤的免疫效應(yīng)或化療藥物的影響。根據(jù)免疫特性選擇供體細(xì)胞可能是減少GVHD異質(zhì)性的關(guān)鍵因素。
使用UCB衍生的CAR-T細(xì)胞可降低GVHD的發(fā)病率和嚴(yán)重程度。來源于臍帶血的T細(xì)胞具有獨(dú)特的抗原初始狀態(tài)，這可能是臍帶血移植物的同種反應(yīng)性降低的原因。胎盤來源的干細(xì)胞可以用來產(chǎn)生T細(xì)胞或自然殺傷（NK）細(xì)胞。胎盤具有獨(dú)特的HLA表達(dá)模式，與其它組織不同，絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞只表達(dá)HLA-C、HLA-E和HLA-G，合胞滋養(yǎng)層細(xì)胞HLA陰性。這些特異性對胎盤來源的T細(xì)胞的影響暫時(shí)還沒有相關(guān)研究報(bào)道。
iPSCs的T細(xì)胞也可以作為異體CAR-T細(xì)胞的來源。理論上講，iPSCs細(xì)胞系具有無限的自我更新能力，可以無限期地儲存和使用?？梢杂镁哂泄餐琀LA單倍型的iPSCs以最小化iPSCs CAR-T細(xì)胞的免疫排斥反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。使用iPSCs的另外一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是CAR-T細(xì)胞是由一個(gè)克隆多能干細(xì)胞系產(chǎn)生的，因此是均勻的。
供體和受體之間的HLA不匹配觸發(fā)免疫識別，可能導(dǎo)致移植物排斥反應(yīng)及GVHD。GVHD是SCT發(fā)病和死亡的主要原因，研究表明αβ 型T細(xì)胞在急慢性GVHD發(fā)病中起著重要作用。αβ型T細(xì)胞的TCR識別主要組織相容性復(fù)合物（MHC）分子（人類的HLA系統(tǒng)）位點(diǎn)。而MHC位點(diǎn)是人類基因組中最具多態(tài)性的區(qū)域，導(dǎo)致了成千上萬的MHC差異表達(dá)。αβ 型T細(xì)胞與外源MHC分子相互作用，是移植排斥反應(yīng)和GVHD的關(guān)鍵。目前，有幾種策略降低異體CAR-T療法發(fā)生GVHD的風(fēng)險(xiǎn)。
這種方法僅限于接受同種異體干細(xì)胞移植（SCT）但隨后復(fù)發(fā)的患者，在這種情況下，CAR-T細(xì)胞可以從原始供體中獲得。在最近的一份報(bào)告中，20例B細(xì)胞惡性腫瘤患者輸注來自同一供體的CD19 CAR-T細(xì)胞后，6例完全緩解，2例部分緩解，且無GVHD產(chǎn)生。緩解期患者血CAR-T細(xì)胞水平高于未緩解期患者，3周后CAR-T細(xì)胞顯著下降。該結(jié)果顯示異體來源的CAR-T細(xì)胞可能被納入同種異體SCT的策略中，以增強(qiáng)移植物抗腫瘤效應(yīng)，而不會增加GVHD的風(fēng)險(xiǎn)。
NK細(xì)胞最初被鑒定為具有殺死腫瘤細(xì)胞的能力，是機(jī)體天然腫瘤免疫監(jiān)視的一個(gè)組成部分。NK細(xì)胞對細(xì)胞具有高度的腫瘤細(xì)胞溶解性，一些研究表明，不同類型的腫瘤中存在NK細(xì)胞功能障礙，說明腫瘤已經(jīng)進(jìn)化出逃避NK細(xì)胞殺傷的機(jī)制。因此，通過給NK細(xì)胞裝備CAR來增強(qiáng)其抗腫瘤活性是一個(gè)很有吸引力的策略。Chu等人證明裝備CAR的NK細(xì)胞增強(qiáng)了NK細(xì)胞的抗腫瘤活性。在另一項(xiàng)研究中，用來自健康供體的NK細(xì)胞表達(dá)一種EGFR 靶向CAR，顯示出較好的抗膠質(zhì)母細(xì)胞瘤活性。
外周血中NK細(xì)胞濃度相對較低，可采用體外特異性富集和擴(kuò)增NK細(xì)胞的策略。表達(dá)IL-2 NK92細(xì)胞系已被批準(zhǔn)用于人類。使用CD19 CAR–IL–15轉(zhuǎn)導(dǎo)的NK細(xì)胞與CD19 CAR NK細(xì)胞對照相比，在異種移植小鼠淋巴瘤小鼠模型中具有更長的生存期。
γδ型 T細(xì)胞能對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生自然細(xì)胞毒性反應(yīng)，在體外γδ 型T細(xì)胞可以大量擴(kuò)增，且不誘發(fā)GVHD，因?yàn)槠銽CR的激活不受MHC的限制。靶向在神經(jīng)膠質(zhì)瘤和其它神經(jīng)外胚層腫瘤中常過度表達(dá)的雙唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GD2的γδ 型CAR-T增強(qiáng)了對表達(dá)GD2腫瘤的殺傷活性。
由于αβ型TCR是產(chǎn)生T細(xì)胞免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素，研究人員已經(jīng)開發(fā)出阻止TCR在αβ型T細(xì)胞表面表達(dá)的方法。基因編輯是當(dāng)今最有前途的方法之一。αβ型T細(xì)胞表面的TCR蛋白復(fù)合物由α-鏈和β-鏈組成，β鏈基因包含兩個(gè)恒定區(qū)域，而編碼α鏈的只有一個(gè)。因此，敲除α鏈編碼基因是破壞αβ型 TCR最直接的方法。Poirot等人利用TALEN技術(shù)從健康第三方供體生產(chǎn)TCR和CD52缺陷的CAR-T細(xì)胞，在小鼠模型中沒有產(chǎn)生GVHD，并且對 Alemtuzumab有耐藥性，該抗體可用于消滅宿主表達(dá)CD52的T細(xì)胞并避免同種排斥反應(yīng)。
在最新研究中，研究人員將表達(dá)CAR的轉(zhuǎn)基因直接插入到TRAC基因的位點(diǎn)，在破壞T細(xì)胞表達(dá)TCR的同時(shí)，讓CAR轉(zhuǎn)基因在TCR基因啟動子調(diào)控下表達(dá)。動物試驗(yàn)表明，這種方法產(chǎn)生的靶向CD19的CAR-T療法比隨機(jī)插入CAR基因具有更好的抗腫瘤活性。
目前，多項(xiàng)在研的異體CAR-T療法已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓系白血病患者。
CAR-T細(xì)胞治療已經(jīng)改變了一些血液惡性腫瘤的治療前景，目前仍然是最有希望的治療癌癥的方法之一。開發(fā)通用CAR-T細(xì)胞可即時(shí)用于患者治療，降低治療費(fèi)用，顯著增加該療法的應(yīng)用范圍?；蚓庉嫾夹g(shù)可通過控制TCR的表達(dá)來有效消除GVHD產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。對于某些比較敏感的癌癥來說，異體型CAR-T療法在短期內(nèi)就能起到很好的效果，因此不必過于擔(dān)心免疫系統(tǒng)排斥的問題。而對于實(shí)體瘤，我們希望T細(xì)胞在腫瘤附近停留盡量久的時(shí)間，自體型CAR-T療法則會有更大的發(fā)揮空間。目前，盡管在CAR-T治療效率方面仍存在許多挑戰(zhàn)，尤其是在實(shí)體腫瘤中?？蒲泄ぷ髡咭苍诎l(fā)揮聰明才智來解決這些瓶頸，這個(gè)新的治療方法可能會使癌癥治療發(fā)生革命性的變化。
轉(zhuǎn)自：生物制藥小編
